制備液相色譜法以其高分離效率,重現性和低溶劑消耗而著(zhù)稱(chēng),是一種純化技術(shù)。來(lái)自中國的色譜專(zhuān)家團隊應用了傳質(zhì)動(dòng)力學(xué)建模和吸附等溫線(xiàn),以改善該技術(shù)的缺點(diǎn)之一,即超載引起的非線(xiàn)性,這是純化工藝開(kāi)發(fā)中的重要問(wèn)題。液相色譜法仍然是藥物提取和純化的巨大挑戰,因為具有相似結構的化合物可以共存于基質(zhì)中,特別是對于從生物發(fā)酵或肽合成中獲得的藥物。
儲液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統,樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相,被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相)內,由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數,在兩相中作相對運動(dòng)時(shí),經(jīng)過(guò)反復多次的吸附-解吸的分配過(guò)程,各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別,被分離成單個(gè)組分依次從柱內流出,通過(guò)檢測器時(shí),樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀,數據以圖譜形式打印出來(lái)高效液相色譜儀主要有進(jìn)樣系統、輸液系統、分離系統、檢測系統和數據處理系統
因為塵?;蚱渌魏坞s質(zhì)微粒都會(huì )磨損柱塞、密封環(huán)、缸體和單向閥,因此應預先除去流動(dòng)相中的任何固體微粒。流動(dòng)相最好在玻璃容器內蒸餾,而常用的方法是濾過(guò),可采用Millipore濾膜(0.2μm或0.45μm)等濾器。泵的入口都應連接砂濾棒(或片)。輸液泵的濾器應經(jīng)常清洗或更換。
制備液相的流動(dòng)相不應含有任何腐蝕性物質(zhì),含有緩沖液的流動(dòng)相不應保留在泵內,尤其是在停泵過(guò)夜或更長(cháng)時(shí)間的情況下。如果將含緩沖液的流動(dòng)相留在泵內,由于蒸發(fā)或泄漏,甚至只是由于溶液的靜置,就可能析出鹽的微細晶體,這些晶體將和上述固體微粒一樣損壞密封環(huán)和柱塞等。因此,必須泵入純水將泵充分清洗后,再換成適合于色譜柱保存和有利于泵維護的溶劑(對于反相鍵合硅膠固定相,可以是甲醇或甲醇-水)。